在生物醫藥領域，重組蛋白（RTPs）的快速發展為人類健康帶來了希望。隨著超過120種重組抗體獲得歐盟和FDA機構的批準，市值數千億美元，單克隆抗體（mAbs）的市場預計將在2025年超過3000億美元。在這一過程中，中國倉鼠卵巢（CHO）細胞憑借較多的優勢，成為生產RTPs的重要細胞。目前，哺乳動物細胞培養中的mAbs 生產主要采用大規模生物反應器中的連續進料過程。

    CHO細胞具有多種優勢，如不易感染人類病毒，安全性高；RTPs具有與人類細胞相似的翻譯后修飾；高密度CHO細胞可適應懸浮培養，使用化學定義無血清培養基（CD-SFM）并分泌蛋白質到培養基中。

    連續進料培養技術是指在細胞培養過程中，通過連續或脈沖式進料添加濃縮進料培養基，以補充營養物質并延長培養時間。這種方法可以避免營養物質限制，并能促進重組蛋白的更高產量。連續進料處理后細胞在靜止期的培養時間比批次培養更長。連續進料培養需要了解細胞生長和細胞代謝的特點，以及影響RTPs質量和產量的關鍵過程參數。

     由于CHO細胞在指數生長期生長速度快，加速消耗葡萄糖和氨基酸，會導致乳酸和氨的積累。所以在連續進料培養中，溫度、pH和其他過程參數都會影響到抗體表達和質量屬性。然而，使用連續進料培養可以改善CHO細胞中RTPs的表達和生產，但傳統的脈沖式進料輸送也會導致代謝副產品的積累。因此，選擇合理的進料策略非常重要。

     使用不銹鋼生物反應器進行連續進料培養中降低RTPs生產成本已成為制藥工業的研究焦點。連續進料培養已從僅僅追求高產量的重組蛋白轉變為同時追求高產量和高質量的生產目標。

      在細胞培養方面，貼壁CHO細胞在含10%胎牛血清（FBS）的DMEM/F12培養基中，于37℃、5% CO2的條件下生長。選擇無血清培養基（SFM）進行懸浮培養，支持從貼壁培養到懸浮培養模式的轉變。SFM分為普通無血清培養基、無異種血清培養基、無動物血清培養基、無蛋白培養基和化學定義無血清培養基。在細胞懸浮培養中，SFM可以有效避免血清培養帶來的缺點，如污染和純化困難。

批次培養是指一次性添加SFM后，可以在一個時間點收獲重組蛋白的培養方法。由于培養時間短，收集樣本時細胞密度不理想，RTP生產不理想。連續進料模式提高了RTP生產。據報道，在連續進料培養中，單克隆抗體（mAb）的滴度已達到10 g/L以上。近年來，連續進料工藝已成為大規模生產RTP的重要生產過程。然而，保持細胞的高生產力和蛋白質的質量屬性仍然是一個挑戰。

綜上所述，生物反應器連續進料批量培養技術在CHO細胞重組蛋白生產中的應用取得較大進展，已成為生物醫藥領域的重要研究方向。

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