細胞轉染效率低的原因

 細胞轉染實驗是指將DNA、RNA等外源物質通過電轉染或化學轉染的方式導入至細胞內的實驗方法。不同的細胞系轉染難度也各部相同，尤其是對生長條件要求較為苛刻的細胞，比如原代細胞的轉染效率會遠低于其他細胞。這里， 盤點了一下那些可能導致細胞轉染效率低的原因、轉染試劑選擇指南，以便提升您的細胞轉染效率。 

一、實驗條件和操作方法不合規
正常情況下，做細胞轉染實驗前需要充足的準備，比如：細胞、DNA、轉染試劑、培養基等。除了合規的實驗條件以外，還有較為重要的就是實驗操作方法，實驗是一個較為嚴謹的過程，所以每一步的操作步驟都要嚴格按照操作規程和說明書進行操作，才能避免人為原因所造成的失誤。
二、細胞活性不足，細胞密度不足
細胞的生長狀態對細胞的轉染效率的影響較大，細胞長勢弱或者細胞的鋪板密度過低，可能會轉染試劑的細胞毒性而導致轉染效率過低，甚至轉染失敗。因此細胞轉染時機應在細胞的對數生長期，細胞的鋪板密度一般以90%-95左右為宜。
三、轉染的DNA或RNA濃度過低、質量過低
如果轉染質粒的DNA或RNA的純度不夠，其中的其它外源物質可能會干擾細胞造成輕微的細胞毒性，進而影響到細胞的轉染效率。正常情況下，用于細胞轉染的質粒濃度應大于500ng/ul。在做RNA轉染實驗時，可以嘗試Lip RNAiMAX Transfection Reagent試劑，這類試劑的細胞毒性較低，轉染效率較高，并且操作簡單易于優化，比較適用于高通量轉染。

四、細胞本身轉染難度大 
細胞轉染效率低的原因還跟需要轉染的細胞類型有關。細胞類型的不同，轉染效率也會有較大差別。尤其是MSC細胞、PSC干細胞、神經干細胞、原代細胞等， 對于一些較難轉染的細胞，可以嘗試高效率的轉染試劑或者使用其他轉染方法，靈活變化。比如：使用Lipofectamine  Stem試劑。
五、轉染試劑選擇不當
轉染試劑的選擇時保證細胞轉染效率的關鍵，低質量的轉染試劑可能具有較強的細胞毒性，操作過程繁雜，出現轉染效果不穩定等現象，遇到難轉細胞系甚至出現轉染失敗。實驗室里經常使用的LIP2000，LIP3000的轉染試采用脂質體納米顆粒技術，能夠將轉染的效率提升10倍作用，比較適合用于HEK293、原代細胞、干細胞等難以轉染的細胞類型，并且還具有可重復性。
        以上總結的是一些常見的影響細胞轉染效率的因素，可供實驗參考，更多關于細胞轉染效率的原因 、LIP3000、LIP2000相關產品需求可進入蘇州阿爾法生物網站。